Genotyping of Malassezia pachydermatis disclosed genetic variation in isolates from dogs in Colombia / Genotipagem de Malassezia pachydermatis revelou variação genética em isolados de cães na Colômbia

Malassezia pachydermatis is a lipophilic and lipid-dependent yeast mostly isolated from animals' skin; hence, it is regarded as a zoophilic species causing otitis externa in dogs. Aspects associated with its epidemiology and pathogenicity is a matter of interest. This study aimed to conduct a molecular characterization of 43 isolates of M. pachydermatis obtained from dogs with otitis externa. For this purpose, the 5.8S internal transcribed spacer 2 (ITS2) and D1/D2 26S rRNA regions were amplified, sequenced and analyzed using restriction fragment length polymorphism (RFLP) with AluI, CfoI, and BstF5I endonucleases. Phylogenetic analyses revealed that these isolates grouped with the sequence types I, IV and V, previously proposed for M. pachydermatis. Interestingly, we found a new polymorphic RFLP pattern using BstF5I, these isolates were associated with the sequence types IV and V, nevertheless an association between polymorphic RFLP patterns, and fosfolipase activity or canine population data was not observed. These findings underline the genetic diversity of M. pachydermatis and provide new insights about the epidemiology of this species in the analyzed population.(AU)

Malassezia pachydermatis é uma levedura lipofílica e dependente de lipídios, principalmente da pele de animais. Sendo, por essa razão, considerada uma espécie zoofílica e causadora de otite externa em cães. Neste sentido, aspectos associados à sua epidemiologia e patogenicidade constituem um tema de interesse científico. O objetivo deste estudo foi realizar a caracterização molecular de 43 isolados de M. pachydermatis obtidos a partir de cães com otite externa. Para esta propósito, foram amplificadas, sequenciadas e analisadas com enzimas de restrição as regiões do gene 5.8S, do espaçador interno transcrito 2 (ITS2) e D1/D2 do 26S do rRNA pelo método RFLP, com as endonucleases AluI, CfOI e BstF5I. Análises filogenéticas revelaram que os isolados se agruparam com as sequências tipo I, IV e V de M. pachydermatis como já descrito anteriormente. De maneira interessante, se observou um novo RFLP polimórfico utilizando BstF5I. Os isolados que mostraram esse padrão foram associados com os padrões IV e V. No entanto, não foi observada associação entre padrões polimórficos de RFLP e atividade de fosfolipase ou dados da população canina. Estes resultados demonstram a diversidade genética de M. pachydermatis e fornecem novas perspectivas sobre a epidemiologia destas espécies na população analisada.(AU)

Actividad antifúngica in vitro de azoles y anfotericina B frente a Malassezia furfur por el método de microdilución M27-A3 del CLSI y Etest® / In vitro antifungal activity of azoles and amphotericin B against Malassezia furfur by the CLSI M27-A3 microdilution and Etest® methods

Antecedentes. Malassezia furfur es una levadura comensal de la piel del ser humano que ha sido asociada con la presencia de algunas entidades dermatológicas e infecciones sistémicas oportunistas. Por su condición dependiente de lípidos, los métodos de referencia establecidos para las levaduras por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para evaluar la sensibilidad antifúngica no son aplicables. Objetivos. Evaluar la sensibilidad in vitro de aislamientos de M. furfur asociados a procesos patológicos en el ser humano frente a antifúngicos de uso clínico. Métodos. Se evaluó el perfil de sensibilidad a la anfotericina B, el itraconazol, el ketoconazol y el voriconazol de 20 aislamientos de M. furfur mediante el método de microdilución en caldo (CLSI M27-A3) y Etest®. Resultados. El itraconazol y el voriconazol presentaron la mayor actividad antifúngica frente a los aislamientos evaluados. El acuerdo esencial entre los dos métodos usados para evaluar la actividad antifúngica de los azoles estuvo en el 60-85%, y el acuerdo categórico en el 70-80%; para la anfotericina B tanto el acuerdo esencial como el categórico fueron del 10%. Conclusiones. De acuerdo con los dos métodos evaluados los azoles fueron los compuestos que presentaron la mayor actividad antifúngica frente a M. furfur; sin embargo, es necesario realizar más estudios que permitan afirmar que Etest® es un método confiable para ser implementado en la rutina del laboratorio clínico (AU)

Background. Malassezia furfur is a human skin commensal yeast that can cause skin and opportunistic systemic infections. Given its lipid dependant status, the reference methods established by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) to evaluate antifungal susceptibility in yeasts are not applicable. Aims. To evaluate the in vitro susceptibility of M. furfur isolates from infections in humans to antifungals of clinical use. Methods. The susceptibility profile to amphotericin B, itraconazole, ketoconazole and voriconazole of 20 isolates of M. furfur, using the broth microdilution method (CLSI M27-A3) and Etest®, was evaluated. Results. Itraconazole and voriconazole had the highest antifungal activity against the isolates tested. The essential agreement between the two methods for azoles antifungal activity was in the region of 60-85% and the categorical agreement was around 70-80%, while the essential and categorical agreement for amphotericin B was 10%. Conclusions. The azoles were the compounds that showed the highest antifungal activity against M. furfur, as determined by the two techniques used; however more studies need to be performed to support that Etest® is a reliable method before its implementation as a routine clinical laboratory test (AU)

[In vitro antifungal activity of azoles and amphotericin B against Malassezia furfur by the CLSI M27-A3 microdilution and Etest® methods]. / Actividad antifúngica in vitro de azoles y anfotericina B frente a Malassezia furfur por el método de microdilución M27-A3 del CLSI y Etest®.

BACKGROUND: Malassezia furfur is a human skin commensal yeast that can cause skin and opportunistic systemic infections. Given its lipid dependant status, the reference methods established by the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) to evaluate antifungal susceptibility in yeasts are not applicable. AIMS: To evaluate the in vitro susceptibility of M. furfur isolates from infections in humans to antifungals of clinical use. METHODS: The susceptibility profile to amphotericin B, itraconazole, ketoconazole and voriconazole of 20 isolates of M. furfur, using the broth microdilution method (CLSI M27-A3) and Etest®, was evaluated. RESULTS: Itraconazole and voriconazole had the highest antifungal activity against the isolates tested. The essential agreement between the two methods for azoles antifungal activity was in the region of 60-85% and the categorical agreement was around 70-80%, while the essential and categorical agreement for amphotericin B was 10%. CONCLUSIONS: The azoles were the compounds that showed the highest antifungal activity against M. furfur, as determined by the two techniques used; however more studies need to be performed to support that Etest® is a reliable method before its implementation as a routine clinical laboratory test.

Análisis retrospectivo (2009-2010) de las alteraciones dermatológicas, óticas y oftalmológicas con diagnóstico clínico presuntivo de micosis en caninos y felinos / Análise retrospectiva (2009-2010) das alterações dermatológicas, óticas e oftalmológicas com diagnóstico clínico presuntivo de micose em cães e gatos / A retrospective analysis (2009-2010) of the dermatological, ear and ophtalmological alterations with presumptive clinical diagnosis of mycosis in canines and felines

Objetivo. Determinar la prevalencia de las alteraciones dermatológicas, óticas y oftalmológicas clínicamente presuntivas de ser causadas por hongos y analizar demográficamente su presentación. Materiales y métodos. Se realizó un estudio retrospectivo en una clínica para pequeños animales en Bogotá; se revisaron historias clínicas de pacientes que consultaron por alteraciones dermatológicas, óticas y oftalmológicas durante 2009 y 2010. Resultados. En el período evaluado la prevalencia de las alteraciones dermatológicas en caninos fue de 7,8%, las óticas de 4,2% y las oftalmológicas de 3,3%. Dentro de las alteraciones dermatológicas, la sospecha etiológica principal por diagnóstico clínico fueron los dermatofitos con 86,9%, en las alteraciones óticas fue Malassezia con 86,5% y para las oftalmológicas fue Candida con 83,3%. El análisis estadístico de variables no mostró asociación con los síntomas ni con los agentes etiológicos diagnosticados clínicamente; sin embargo, la evaluación categorizada evidenció asociaciones entre razas y edades con las etiologías por diagnóstico clínico. El diagnóstico de las etiologías micóticas se estableció en la mayoría de los casos por hallazgos clínicos y con menor frecuencia por raspado de piel y citología ótica; en ninguno de los casos se realizó cultivo micológico. La población felina no presentó alteraciones dermatológicas, óticas y oftalmológicas clínicamente compatibles con etiología fúngica. Conclusión. En caninos, la prevalencia de las alteraciones dermatológicas clínicamente compatibles con dermatofitos fue de 86,9%, los procesos óticos asociados con Malassezia de 86,5% y los oftalmológicos sospechosos de Candida con 83,3%. Los diagnósticos definitivos se establecieron por hallazgos clínicos sin la realización de metodologías diagnósticas estándar como el cultivo...

A retrospective analysis (2009-2010) of the dermatological, ear and ophtalmological alterations with presumptive clinical diagnosis of mycosis in canines and felines. Objective. To determine the prevalence of dermatological, ear and ophthalmological alterations clinically presumptive to be caused by fungi and to analyze their occurrence demographically. Materials and methods. We carried out a retrospective study in a clinic in Bogota for small animals. We reviewed the medical histories of patients who requested medical appointments due to dermatological, ear and ophtalmological alterations in 2009 and 2010. Results. In the assessed period, the prevalence of dermatological alterations in dogs was of 7.8%, 4.2% of ear alterations and of 3.3% of ophtalmological alterations. The main etiological suspects through clinical diagnosis were: dermatophytes with an incidence of 86.9% among dermatological alterations, Malassezia with an 86.5% of incidence in ear alterations, and Candida with 83.3% of incidence in ophtalmological alterations. Statistical analysis of variables showed no association with symptoms or clinically diagnosed etiological agents, but the categorized evaluation showed associations of races and ages with the etiologies through clinical diagnosis. The diagnosis of fungal etiologies was accomplished in most cases by clinical findings and less frequently by skin scrapings and ear cytology; in none of the cases a mycological culture was done. The feline population showed no dermatological, ear or ophtalmological alterations compatible with a fungal etiology. Conclusion. In canines, the prevalence of dermatological alterations clinically compatible with dermatophytes was of 86.9%; ear alterations associated with Malassezia were of 86.5%; and ophtalmological alterations Candida-suspected were 83.3%. Final diagnoses were accomplished with the help of clinical findings without following standard diagnostic methodologies such as cultivation...

Análise retrospectiva (2009-2010) das alterações dermatológicas, óticas e oftalmológicas com diagnóstico clínico presuntivo de micose em cães e gatos. Objetivo. Determinar a prevalência das alterações dérmicas, óticas e oftálmicas clinicamente presuntivo de serem causadas por fungos e analisar demograficamente sua apresentação. Materiais e métodos. Foi realizado um estudo retrospectivo numa clínica para pequenos animais em Bogotá; foram revisadas as histórias clínicas de pacientes com alterações dérmicas, óticas e oftalmicas em 2009 e 2010. Resultados. Durante o período de avaliação a prevalência das alterações dérmicas em cães foi de 7,8%, as óticas de 4,2% e as oftálmicas de 3,3%. Dentro das alterações dérmicas, a principal suspeita etiológica por diagnóstico clínico foram os dermatófitos com 86,9%, nas alterações óticas foi Malassezia com 86,5% e para as oftálmicas foi Candida com 83,3%. A análise estatística das variáveis não apresentou associação com os sintomas ou com os agentes etiológicos diagnosticados clínicamente; embora, a avaliação categorizada evidenciou associações entre raças e idades com as etiologias por diagnóstico clínico. O diagnóstico das etiologias micóticas foi estabelecido na maioria dos casos pelos achados clínicos e, menos freqüentemente por raspados de pele e citologia ótica, em nenhum dos casos foi realizada uma cultura micótica. A população felina não apresentou alterações dérmicas, óticas e oftálmicas clinicamente compatíveis com etiologia fúngica. Conclusão. Em cães, a prevalência das alterações dérmicas clinicamente compatíveis com dermatófitos foi de 86,9%, os processos óticos associados com Malassezia foi de 86,5% e os oftálmicos suspeitos de Candida foi de 83,3%. Os diagnósticos definitivos foram estabelecidos pelos achados clínicos sem a realização de métodos diagnósticos padroes, como o cultivo...